Die Sixtinische Kapelle im Vatikan wurde zwischen 1475 und 1483 unter dem Papst Sixtus IV. erbaut und am 9. August 1483 eingeweiht. Die Pläne für die Kapelle wurden von Baccio Pontelli erstellt. Der Grundriss versucht den Dimensionen des Tempels Salomon zu entsprechen. Besondere Berühmtheit hat die Kapelle durch ihre Ausschmückung mit Fresken erlangt: Die Wandgemälde zeigen Szenen aus dem Leben von Jesus und Moses und wurden von verschiedenen Malern der Renaissance geschaffen: Sandro Botticelli, Pietro Perugino oder Luca Signorelli. Das Decken- und Altargemälde wurde von Michelangelo Buonarroti zwischen 1508 bis 1512 und 1535 bis 1541 gemalt. Das Deckengemälde zeigt Szenen aus der Genesis auf insgesamt 520 Quadratmetern. Es enthält 115 überlebensgroße Charaktere. Insbesondere der Ausschnitt "Die Erschaffung Adams" ist ein weltberühmtes und oft reproduziertes Werk. Es zeigt, wie Gottvater mit ausgestrecktem Finger Adam das Leben einhaucht. Das Altargemälde stellt das Jüngste Gericht auf über 200 Quadratmetern dar. Das Gemälde enthält ca. 390 Figuren, viele davon überlebensgross.

Es wird angenommen, dass Michelangelo sämtliche Arbeiten an den Fresken ohne die Mithilfe von anderen Künstlern und Assistenten ausgeführt hat (was für die damalige Zeit eher unüblich war). Kunsthistoriker gingen ursprünglich davon aus, dass Michelangelo mit sehr gedämpften Farben gemalt hat. Die letzte ausgiebige Restaurierung (1980–1994), die unter anderem alte Rußspuren entfernte und im Laufe von Jahrhunderten nachgedunkelte Flächen aufhellte, ließ aber geradezu leuchtende Farben zum Vorschein kommen. Außerdem wurden bei der Restaurierung auch Schäden von früheren Restaurierungen behoben und Übermalungen von als unsittlich empfundenen Ausschnitten wieder in den Urzustand zurückversetzt. Diese Übermalungen wurden nach dem Tod von Michelangelo aufgrund des Erlasses ("Pictura in Cappella Ap.ca coopriantur") angebracht um die Darstellung von Geschlechtsteilen zu verhindern. Die Fresken des Michelangelo für die Sixtinische Kapelle werden mitunter als die bedeutendsten Werke des Künstlers und der ganzen damaligen Kunstepoche bezeichnet. Die Kapelle ist heute Teil der Vatikanischen Museen und kann auch besichtigt werden. Während eines Konklaves, der Papstwahl, wird sie von den Kardinälen genutzt.